附錄A.規(guī)范性附錄,細(xì)菌定量殺滅試驗(yàn)A,1、試驗(yàn)原理 將規(guī)定濃度的細(xì)菌懸液以一定比例與酸性電解水混合,作用至規(guī)定的時(shí)間后加入中和劑,終止酸性電解水的殺菌活性,進(jìn)行活菌計(jì)數(shù),然后與陽(yáng)性對(duì)照組細(xì)菌懸液中的菌落數(shù)進(jìn)行比較.以確定其殺菌效果,A.2、懸液定量殺菌試驗(yàn)A.2、1 菌懸液的制備A.2,1 1.按。消毒技術(shù)規(guī)范,2002年版。要求將細(xì)菌繁殖體和枯草桿菌黑色變種芽孢制成2,109CFU mL,9,109CFU、mL的試驗(yàn)用菌懸液.A、2,1 2、按、消毒技術(shù)規(guī)范,2002年版、要求將白色念珠菌制成2、108CFU,mL 9。108CFU.mL的試驗(yàn)用菌懸液.A。2,2、懸液定量殺菌試驗(yàn)操作程序A.2.2 1,開(kāi)啟生成器.待產(chǎn)生的酸性電解水中有效成分處于穩(wěn)定狀態(tài)時(shí)。用250mL磨口錐形瓶接取滿瓶后,蓋好瓶蓋,置20、1 水浴備用,A,2,2、2 取消毒試驗(yàn)用無(wú)菌大試管 先加入0.05mL試驗(yàn)用菌液 再加入0.05mL有機(jī)干擾物質(zhì)?;靹?,置20、1 水浴中5min后。用無(wú)菌吸管吸取酸性電解水9 9mL注入其中。迅速混勻并立即計(jì)時(shí),A。2、2,3.待試驗(yàn)菌與消毒劑相互作用至各預(yù)定時(shí)間。分別吸取0、5mL試驗(yàn)菌與酸性電解水的混合液加于含4。5mL中和劑,0,1,硫代硫酸鈉。0 1,吐溫80的生理鹽水 的試管中.混勻,作用10min后 分別吸取1,0mL樣液、按活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)方法測(cè)定存活菌數(shù).每管樣液接種2個(gè)平皿,如平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)較多時(shí),可進(jìn)行系列10倍稀釋后。再進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù),A、2.2。4。同時(shí)用標(biāo)準(zhǔn)硬水代替酸性電解水、進(jìn)行平行試驗(yàn).作為陽(yáng)性對(duì)照、A.2,2 5。所有試驗(yàn)樣本均在37.溫箱中培養(yǎng).對(duì)細(xì)菌繁殖體培養(yǎng)48h觀察最終結(jié)果。對(duì)細(xì)菌芽孢和白色念珠菌需培養(yǎng)72h觀察最終結(jié)果 A。2、2。6,試驗(yàn)重復(fù)3次.包括對(duì)照。計(jì)算各組的活菌濃度 CFU。mL。并換算為對(duì)數(shù)值 N、然后按式,A 1。計(jì)算殺滅對(duì)數(shù)值.A 2。3.殺滅對(duì)數(shù)值的計(jì)算,計(jì)算各組的活菌濃度 CFU、mL.并換算為對(duì)數(shù)值,N、然后按式、A、1、計(jì)算殺滅對(duì)數(shù)值.KL.N0.Nx A,1.式中,KL,殺滅對(duì)數(shù)值 N0,對(duì)照組平均活菌濃度的對(duì)數(shù)值.Nx、試驗(yàn)組活菌濃度對(duì)數(shù)值、計(jì)算殺滅對(duì)數(shù)值時(shí)、取小數(shù)點(diǎn)后兩位值??梢赃M(jìn)行數(shù)字修約 但是,如果消毒試驗(yàn)組消毒處理后平均生長(zhǎng)菌落數(shù)小于1CFU 殺滅對(duì)數(shù)值即大于或等于對(duì)照組平均活菌濃度的對(duì)數(shù)值.KL lg。N0、A 2 4,評(píng)價(jià)規(guī)定.取酸性電解水原液與3個(gè)作用時(shí)間,重復(fù)試驗(yàn)3次。在最短作用時(shí)間、以及最短作用時(shí)間的1、5倍時(shí).對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌.枯草桿菌黑色變種芽孢。各次試驗(yàn)的殺滅對(duì)數(shù)值均、5.00 對(duì)白色念珠菌,各次試驗(yàn)的殺滅對(duì)數(shù)值均,4,00、判定為消毒合格、A 2、5、注意事項(xiàng)A,2,5,1.試驗(yàn)中所使用的中和劑、稀釋液和培養(yǎng)基等、各批次均應(yīng)進(jìn)行無(wú)菌檢查。發(fā)現(xiàn)有菌生長(zhǎng) 則全部試驗(yàn)需換用未污染試劑或培養(yǎng)基重做,A、2.5、2、進(jìn)行細(xì)菌液定量殺菌試驗(yàn)時(shí)、對(duì)用于清洗物品的消毒或用于沖洗浸泡消毒。有機(jī)干擾物質(zhì)采用0。3、3g,L.牛血清白蛋白、對(duì)未清洗的物品或有機(jī)物較多的物品的消毒 有機(jī)干擾物采用3,30g,L.牛血清白蛋白,