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附錄A，規(guī)范性附錄.滅菌效果檢測方法A。1 方法原理、本試驗以常見的硬式鏡不銹鋼材料管腔.軟式鏡聚四氟乙烯材料管腔為模擬管腔.驗證微生物的滅菌效果.本試驗應(yīng)采用兩端開口的無縫測試管腔、如有接縫,則應(yīng)保證氣密性.在管腔中央放置染有細菌芽孢的載體,通過半周期滅菌循環(huán).無菌生長、以嗜熱脂肪桿菌芽孢為指標(biāo)菌 同時進行微生物滅菌效果評價。所有試驗均為陰性培養(yǎng)結(jié)果、則判定結(jié)果合格.A 2 生物指示物,嗜熱脂肪桿菌芽孢.ATCC7953，A 3.驗證器材A、3,1,載體.將芽孢液均勻涂布在直徑為0 4mm。長度為20mm、30mm不銹鋼檢測材質(zhì)上,以染菌后不堵塞管腔為限 嗜熱脂肪桿菌芽孢陽性回收菌量應(yīng)為1、106CFU、載體，5。106CFU。載體、室溫下自然干燥后再使用.A、3、2.檢測管腔,本試驗宜采用兩端開口的無縫測試管腔、如有接縫、則應(yīng)保證氣密性、A、3。3,不銹鋼材質(zhì)無接縫管腔、10根.A，3、4、聚四氟乙烯無接縫管腔。10根，A，3,5，嗜熱脂肪桿菌芽孢的TSB培養(yǎng)基，干粉胰蛋白胨17 0g 植物蛋白胨3、0g 氯化鈉5 0g、磷酸氫二鉀2,5g。葡萄糖2 5g，共30g溶于1L蒸餾水中，制成胰蛋白胨大豆肉湯,TSB。培養(yǎng)基，A 4、操作步驟A 4 1 將染菌的載體送達不銹鋼管腔的正中央。制作10根測試樣本，將10根測試樣本均勻平行擺放在器械盒內(nèi)，用雙層無紡布包裹、放置在滅菌艙內(nèi).滅菌艙內(nèi)如僅一層隔架。則10根樣本平行擺放在器械盒內(nèi)放置在滅菌艙中央.見圖A。1 若滅菌艙內(nèi)可擺放上下兩層隔架，則將10根樣本均勻擺放在兩個器械盒內(nèi) 分別放置在滅菌艙內(nèi)上下兩層隔架中央 見圖A。2，按照。消毒技術(shù)規(guī)范、2002版 中的滅菌操作步驟進行半周期滅菌 滅菌結(jié)束后以無菌操作取出細菌芽孢載體,均放到TSB培養(yǎng)基中、56,培養(yǎng)48h、觀察培養(yǎng)結(jié)果.如無細菌生長則繼續(xù)培養(yǎng)至7d。培養(yǎng)結(jié)果仍無細菌生長則判斷為陰性、A。4，2。將染菌的體用細絲送達聚四氟乙烯管腔的正中間，制作10根測試樣本 將10根測試樣本均勻平行擺放在器械盒內(nèi)，用雙層無紡布包裹.放置在滅菌艙內(nèi)，滅菌艙內(nèi)如僅一層隔架,則10根樣本平行擺放在器械盒內(nèi)放置在滅菌艙中央,見圖A,3，若滅菌艙內(nèi)可擺放上下兩層隔架,則將10根樣本均勻擺放在兩個器械盒內(nèi),分別放置在滅菌艙內(nèi)上下兩層隔架中央、見圖A，4，按照,消毒技術(shù)規(guī)范、2002年版,中的滅菌操作步驟進行半周期滅菌.滅菌結(jié)束后取出細菌芽孢載體,全部放到TSB培養(yǎng)基中、56,培養(yǎng)48h.觀察培養(yǎng)結(jié)果如無細菌生長則繼續(xù)培養(yǎng)至7d 培養(yǎng)結(jié)果仍無細菌生長則判定陰性 A、5。結(jié)果計算 嗜熱脂肪桿菌芽孢重復(fù)以上兩種材質(zhì)的模擬管腔.微生物測試各重復(fù)5次、A,6,結(jié)果判定。測試結(jié)果均無細菌生長、為陰性，則判定無菌合格、