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附錄F。潔凈室生物學(xué)評價方法F，1?；?排風(fēng)高效過濾風(fēng)口微生物透過率F.1.1、儀器設(shè)備和材料應(yīng)符合以下要求，1,儀器設(shè)備。Φ90玻璃平皿 或塑料平皿.空氣微生物采樣器。固體撞擊式采樣器 離心式采樣器、液體沖擊式采樣器等均可使用，常用的為安德遜、Andersen,采樣器。隸屬于固體撞擊式采樣器.微生物氣溶膠發(fā)生器、由氣泵，油水分離器。流量計.高效過濾器 噴霧器,緩沖瓶等組成、各種玻璃移液管,吸管、試管,容器瓶等,計時器、如秒表。恒溫培養(yǎng)箱 潔凈工作臺。高壓蒸汽消毒鍋,2。材料，胰蛋白酶大豆瓊脂培養(yǎng)基，生理鹽水.75。酒精.菌種 宜選用毒性小或沒有毒性,且便于區(qū)別大氣雜菌的特定菌種，常用的有枯草芽孢桿菌、黏質(zhì)沙雷氏菌.大腸噬菌體等.采樣介質(zhì)可選用硅酮類，石油胨類，醇類。糖類。纖維素類.蛋白類、混合類.組織培養(yǎng)液等、套筒。測定回.排風(fēng)高效過濾風(fēng)口時需要使用,罩住整個入口，使檢漏范圍包括邊框 長度應(yīng)使通過氣流時間為0.5s、1s,見圖F。1。1，F(xiàn)。1.2、透過率應(yīng)按以下方法評價,在回，排風(fēng)高效過濾風(fēng)口進(jìn)風(fēng)端加設(shè)套筒、在套筒口部發(fā)生微生物氣溶膠、在過濾器出風(fēng)面用浮游菌法采樣。由回。排風(fēng)高效過濾風(fēng)口前后的微生物氣溶膠濃度可計算得出微生物透過率.F,1。3。檢測步驟應(yīng)符合下列要求.1,制定方案、明確評價任務(wù)。制定詳細(xì)的評價方案 包括確定微生物氣溶膠、發(fā)生器所需的菌液濃度,潔凈壓縮空氣流量，確定在回，排風(fēng)高效過濾風(fēng)口出風(fēng)端的微生物采樣周期.采樣次數(shù)等、一般可根據(jù)回、排風(fēng)高效過濾風(fēng)口的塵埃顆粒物過濾效率進(jìn)行計算，2,實驗準(zhǔn)備.根據(jù)預(yù)先制定的評價方案.準(zhǔn)備所需材料、儀器設(shè)備 制作采樣培養(yǎng)皿 一般而言,采樣細(xì)菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。采集真菌用沙氏或真菌選擇培養(yǎng)基。采樣病毒用根據(jù)病毒特性配制的采樣介質(zhì) 3、發(fā)生微生物氣溶膠。將培育好的高濃度微生物溶液、一般為.108 1010.cfu，mL,利用生理鹽水按10倍稀釋法逐次稀釋至需要的低濃度,步驟1確定的濃度。然后由移液管、吸管量取一定容積的低濃度微生物溶液至氣溶膠發(fā)生裝置的溶液瓶 由微生物氣溶膠發(fā)生器在回、排風(fēng)高效過濾風(fēng)口的進(jìn)風(fēng)端將微生物溶液霧化發(fā)生微生物氣溶膠 4，采樣,對于回，排風(fēng)高效過濾風(fēng)口,可在其后的出風(fēng)管道中采樣,離排風(fēng)高效過濾風(fēng)門的距離根據(jù)實際工程而定、原則上出風(fēng)后有所混合 能近則好 采樣點沿風(fēng)管寬度方向均勻布置3點，采樣周期 采樣次數(shù)按預(yù)先制定的評價方案執(zhí)行.采樣過程中,不能中斷微生物氣溶膠的發(fā)生.采樣結(jié)束后才能停止發(fā)生微生物氣溶膠，此后噴霧器中必須尚存不少于一半的微生物溶液、且需對剩余菌液活性進(jìn)行涂布法驗證。以修正菌液濃度,5,培養(yǎng)。將采好的平皿立即蓋上蓋,細(xì)菌類在,35,37,培養(yǎng),1。2、d,結(jié)核菌培養(yǎng)3周.真菌在28.培養(yǎng)3d，上述培養(yǎng)時間可根據(jù)所采樣微生物特性而適當(dāng)調(diào)整、培養(yǎng)的過程中應(yīng)定期觀察培養(yǎng)箱內(nèi)菌落的生長情況,避免培養(yǎng)箱內(nèi)干燥菌落不生長或培養(yǎng)皿內(nèi)菌落過多充分生長匯合等情況的發(fā)生 6、計數(shù)，可以目測 電子顯微鏡，菌落計數(shù)器等對采集到且培養(yǎng)好的菌落進(jìn)行計數(shù),當(dāng)采到的菌落很多時。在它們未生長匯合前.用顯微鏡及早觀察,將平皿劃成許多相等的部分抽出一部分?jǐn)?shù)菌、然后乘以所劃份數(shù) 即可得出每皿總菌數(shù) 計數(shù)完畢后,可根據(jù)式 F 1 3，1、計算濃度。8、消毒滅菌.實驗結(jié)束后.需對剩余菌液以及所用各種儀器、設(shè)備，平皿等進(jìn)行消毒滅菌 酒精擦洗處理，F(xiàn)、1。4.在進(jìn)行潔凈室生物學(xué)評價時應(yīng)符合以下要求，1。正式試驗前,應(yīng)進(jìn)行預(yù)備試驗。并對各種儀器進(jìn)行調(diào)試和標(biāo)定，2,應(yīng)進(jìn)行陽性對照試驗、3,應(yīng)進(jìn)行陰性對照試驗 4 應(yīng)在陽性試驗中長菌,陰性試驗組不長菌、5、實驗過程中應(yīng)注意實驗人員的安全防護(hù),實驗結(jié)束后應(yīng)做好各種儀器，設(shè)備,衣物等的消毒滅菌處理。6,試驗結(jié)束后。需對微生物氣溶膠發(fā)生器內(nèi)的剩余菌液活性進(jìn)行涂布法驗證 修正式,F,1、3。3 中的菌液濃度.7，采樣周期應(yīng)設(shè)計合理,當(dāng)確定采樣周期存在一定困難時 宜增加采樣次數(shù) 每次采樣使用不同的采樣周期